分離と精製の多様なニーズに対応:siRNA から mRNA まで
アジレントはオリゴヌクレオチド分析の多様性を理解しており、優れた分離能、再現性、カラムの寿命化を実現する最適な結合相を提供しています。
Agilent AdvanceBio オリゴヌクレオチドカラムは、高効率、2.7 μm の表面多孔質 Poroshell 粒子が特徴です。アジレント独自のテクノロジーを使用し粒子を化学修飾して、高 pH 移動相に対する耐性を大幅に高めています。また、エンドキャップ処理を施した C18 相でオリゴヌクレオチドの選択性を高めているほか、RNA 分離能標準を用いて AdvanceBio オリゴヌクレオチドをバッチテストすることで、一貫した性能を実現しています。
小さなオリゴヌクレオチドの特性解析
mRNA の特性解析
Agilent PLRP-S ポリマー材料は、オリゴヌクレオチドのイオンペア逆相精製に最適な選択肢です。物理的かつ化学的に堅牢で、必要とされる条件に良好に適応します。
オリゴヌクレオチドの長さに適したポアサイズを選択することは、結合能力と、オリゴヌクレオチド精製全般を最適化するうえで重要です。他社カラムでよく見られる小さなポアサイズでは、非常に大型の分子がポアにアクセスする性能が限られる場合があります。 PLRP-S は、100Å から 1000Å、さらには 4000Å までの広範なポアサイズのラインナップで、この問題に対応しています。ただし、ポアサイズが小さくなるほど、粒子の内部表面が拡大し、分子が大きすぎてポアに適合しないと、保持容量が損なわれます。
RNA、さらには DNA レベルにおいてタンパク質発現を制御する新しい治療法は、過去数十年にわたり、関心と注目を集め続けてきました。オリゴヌクレオチド(ON)の精製は、API と不純物が高い類似性を示すため、特に困難となる場合があります。
アジレントは、各オリゴヌクレオチド API の固有の課題を認識しており、幅広い結合相、ポアサイズ、寸法を提供して、お客様のニーズにお応えします。
1000 Å および 4000 Å 全多孔性粒子を用いた Agilent PL-SAX カラムは、治療用オリゴヌクレオチドの精製に最適です。Tris-HCl などの一般的な緩衝液に、gRNA 分離用の有機溶媒、またはチオール化オリゴヌクレオチドの酸化不純物を分離するための強塩基条件を組み合わせています。
PL-SAX は、従来のシリカやスモールポア結合相とは異なり、pH と温度の安定性が高く、適切なポアサイズを備えているため、多様なオリゴヌクレオチドのサイズや修飾を分離するための要件を満たせます。
RA44694.6135300926
アジレントの PLRP-S ポリマー充填剤には、幅広い粒子とポアサイズが揃っています。 ベンチからプロセスまで、PLRP-S はお客様のニーズに対応します。
High Resolution Separations of Oligonucleotides using PL-SAX Strong Anion-Exchange HPLC Columns(PL-SAX 強アニオン交換 HPLC カラムによるオリゴヌクレオチドの高分解能分離)
アジレントの担当者からの連絡をご希望の場合は、フォームに必要事項を入力してください。
合成オリゴヌクレオチドは、サイズ、構造、修飾が大幅に異なる多様な分子へと発展しています。このような多様性には、親分子に対し高い相同性をもつ、合成関連の多数の不純物が伴います。
この一連の無料トレーニングモジュールでは、オリゴヌクレオチドの精製の理論を取り上げます。結合相の選択から、メソッド最適化、スケールアップ、API 特性解析まで、簡単なビデオモジュールでご覧ください。
モジュール 1 では、収率、分離能、スループットなど、精製メソッドを最適化する際に考慮すべき一連の可変要素について説明します。
合成オリゴヌクレオチドは、数個から数千個の塩基まで、さまざまなサイズがあります。切断、不完全なチオール化、塩基欠損、付加体など、合成に関連する多数の不純物を含んでいる場合があります。純粋な API を得るために精製が必要となる多数の不純物について説明します。
治療薬として用いられるオリゴヌクレオチドには、さまざまなサイズのものがあるため、ポアサイズの選択においては、最大限の結合能力が得られ、かつ効率的な物質移動が可能な大きさのポアにすることが非常に重要です。このモジュールでは、オリゴヌクレオチドの精製と将来のスケールアップに最適なポアサイズを判断するための結合能力の実験について解説します。
アニオン交換(AEX)は、バッファシステムが低コストで、すぐに製造へスケールアップできるため、推奨の精製メソッドとしてよく選択されています。このモジュールでは、温度、有機溶媒、pH などの一般的な可変要素を調整することにより、分離を向上させる AEX の最適化について説明します。
イオンペア逆相分離は多くの場合、オリゴヌクレオチドの特性解析と精製に使用されます。高分離能分離を実現するイオンペア逆相は、困難な共溶出不純物の分離によく利用されています。このモジュールでは、温度、ポアサイズ、イオンペアの選択、将来のスケールアップなど、メソッドの最適化について取り上げます。
オリゴヌクレオチドの合成においては、精製および最終的な製剤、最終的な純度のための API のモニタリングが、重要なスループット処理となります。このモジュールでは、最適なイオンペアやヘキサフルオロイソプロパノール(HFIP)濃度の選択など、オリゴヌクレオチドの特性解析を対象とした LC/MS の使用について検討します。